3D共聚焦显微镜的工作原理。

　　共聚焦系统的光源为离子激光器或HeNe激光器，光源发出的激光束通过照明针孔后成为点光源P。点光源P通过分东器及如高数值孔径显微物镜的成像系统成像后，在部分透明的被测样品内形成像点P。从像点P发出的散射光及反射光(波长为λ1)和其他荧光(波长λf>λ1),反方向经过物镜和分光镜后，入射到单点探测器。单点探测器由探测器和放置在探测器前的针孔组成，3D共聚焦显微镜它可以减少探测器的有效面积。探测器一般使用的是光电倍增管或雪崩光电二极管，探测器接收到的电信号*后由计算机进行处理。

　　①如果激光束聚焦点的直径小于针孔的直径,则P处的针孔可以去掉。

　　②有些材料能自发荧光,有些材料则需要用合适的染料上色。